在使用高壓滅菌鍋之前，首先要將水加到水位線。接下來，將需要滅菌的培養基、蒸餾水或其他容器放入滅菌鍋內，然后關閉鍋蓋并檢查排氣閥和安全閥的狀態。接著打開電源，檢查參數設置是否正確，然后按下“工作”鍵，滅菌鍋開始工作。在達到105攝氏度時，底部排氣閥門會自動關閉，然后壓力開始上升。當溫度上升至121攝氏度時，滅菌鍋會再次自動放氣，并開始記時。一般來說，培養基的滅菌時間為20分鐘，蒸餾水的滅菌時間為30分鐘。當達到規定的滅菌時間后，關閉電源并緩慢打開放氣閥。在壓力指針降至0且放氣閥沒有蒸汽排出時，方可打開鍋蓋。